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sirna轉染實驗步驟與轉染試劑推薦

更新時間:2024-09-06      點擊次數:433

sirna轉染實驗步驟(以 24 孔板為例)

1. 接種細胞

對于貼壁細胞:轉染前一天,將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板,使其在轉染時密度為60%-80% 為佳。

對于懸浮細胞:轉染當天,配制轉染試劑-核酸復合物之前,用PBS清洗細胞1-2次,用250 μL Opti-MEM I 減血清培養基 (無血清) 重懸細胞,在24孔板中進行細胞鋪板,細胞密度為60-80%。

2. 準備轉染試劑-siRNA復合物(或轉染試劑-miRNA復合物)

(1) 對于每孔細胞,取2 μLsiRNA (20 μM,DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中,加入2 μL轉染試劑與siRNA 混合,室溫孵育3 min。

(2) 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養基(無血清),輕輕混勻,在室溫下靜置30 min,形成轉染試劑-核酸復合物。

(3) 30 min后,往上述復合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養基(無血清),輕輕混勻。

3. 轉染細胞

(1) 細胞用PBS清洗1-2次,將上述350µL轉染試劑-siRNA復合物加入每孔細胞。

(2) 在 37℃,5% CO2 培養箱培養 24-48 h,無需更換新的培養液,之后即可檢測基因干擾效果或者后續功能實驗。注:可在轉染12h后補充500 μL完培養基 (含血清)。

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