欧美日韩精品免费一区二区三区-欧美日韩精品乱国产-欧美日韩精品国产一区在线-欧美日韩精品国产一区二区-欧美日韩精品高清一区二区-欧美日韩精品

您好!歡迎訪問和元李記(上海)生物技術有限公司網站!
咨詢熱線

18616108315

當前位置:首頁 > 技術文章 > RNA的提取方法總結

RNA的提取方法總結

更新時間:2022-12-09      點擊次數:2048
  這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。
 
  1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法
 
  原理:使用蛋白質變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性,經過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質,進行密度梯度超速離心,RNA沉淀于管底,而DNA與蛋白質在上清中。使用這種方法,不但能得到高質量的RNA,而且能同時分離出細胞染色體DNA.
 
  本法對于冷凍時間長、細胞質和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質量好和成功率高,已成為提取哺乳動物細胞RNA的常規方法。其缺點是操作復雜、流程長,一次提取的樣品數量有限。
 
  2、鹽酸胍-有機溶劑法
 
  本法有MacDonald 1987年在Strohman報道的方法基礎上改進而成的,適用于沒有超速離心及設備的情況下提取細胞總RNA。它利用鹽酸胍抑制RNA酶,勻漿裂解細胞,有機溶劑抽提去除蛋白質,通過選擇性沉淀RNA分子而去除DNA,提取的RNA質量較好,但整個操作過程繁雜費時。
 
  3、氯化鋰-尿素法
 
  本法首先由Auffray報道,利用高濃度尿素變性蛋白質同時抑制RNA酶,3mol/L LiCl選擇性沉淀RNA。其缺點是有時會存在DNA污染,LiCl沉淀RNA會丟失一些小分子量的RNA,如5S RNA等。優點是快速簡捷,尤其適用于大量樣品少量組織細胞的RNA提取,其質量可以滿足Northern分析,Oligo(dT)提取mRNA,SI核酸酶或RNase保護實驗等。本法每提取107個細胞能提取總RNA約10?g。
 
  4、熱酚法
 
  本法主要用于少量細胞樣品RNA提取,其產量不高,但簡單易行。
 
  5、快速提取法
 
  本法主要用于培養細胞,通過0.5%SDS裂解細胞,酚抽提去除蛋白質和DNA沉淀,快速純化RNA。
 
  6、細胞質RNA提取法
 
  本法主要適用于培養細胞,首先去除細胞核,然后用蛋白酶K消化蛋白質,酚/氯仿抽提去除蛋白質。操作簡單,同時能進行多個樣品操作,多數步驟在室溫下進行,提取的RNA質量較高,可滿足體外無細胞翻譯系統、cDNA合成、引物延伸以及核酸酶SI保護實驗。本法提取的RNA產量一般為30~500?g/107個細胞。
 
  7、酚-氯化鋰法同時提取細胞RNA和DNA
 
  本法是在Elion和Warner報道的方法基礎上,有Sandeep等人于1990年改進而成。它通過酚和SDS裂解細胞,變性,解聚蛋白,抑制RNase,并用EDTA保護DNA,最后根據RNA和DNA在Li+中的不同沉淀速度,而分離DNA和RNA。整個過程在2小時內完成。RNA可用于Northern分析,DNA可用于內切酶消化以及Southern雜交實驗。
 
  8、一步快速熱酚抽提法
 
  基于Shomczynki和Sacchi兩人于1987年報道的RNA快速提取法,美國Promega公司有機地將這些試劑組合成總RNA試劑盒,使操作更為簡單方便,并突出體現以下幾個優點:
 
  1)將已知的RNase抑制劑異硫氰酸胍、b-巰基乙醇和去污劑N-十二烷基肌氨酸鈉聯合使用,抑制了RNA的降解,增強了對核蛋白復合物的解離,使RNA與蛋白質分離進入溶液,提高了RNA的提取產量;
 
  2)RNA選擇性地進入無DNA和蛋白質的水相,容易被異丙醇沉淀濃縮,對大量或少量組織的細胞RNA提取,均甚合適;
 
  3)可在3小時以內處理大量樣品,省略了氯化銫密度梯度超速離心步驟及其它方法使用的長時間選擇性乙醇沉淀或LiCl沉淀。LiCl沉淀不但會導致小RNA(<5.8S)的丟失,而且Li+鹽的殘留還會抑制DNA的合成反應。
微信咨詢
地址:上海市浦東新區紫萍路908弄 傳真:021-50724961
©2024 和元李記(上海)生物技術有限公司 版權所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2023007219號-1
主站蜘蛛池模板: 极致堕落(高h)| 我要看逼| 国产免费成人在线视频| 青青草国产免费久久久91| 国产成人性毛片aaww| 69japanese日本100| 亚洲激情在线| 99撸| 亚洲一区二区三区91| 第一次破学生处破| 男人吃奶动态图| 欧美成黑人性猛交xxoo| julianann办公室| 亚洲欧美午夜| 午夜剧场1000| 四虎影视在线观看2413| 国产在线视频资源| 亚洲夜色夜色综合网站| 全日本爽视频在线| 欧美日韩综合网在线观看| 国产综合亚洲欧美日韩一区二区| 国产精品99久久免费观看| 色导行| 蜜桃视频一区二区| 第一次破女视频国产一级| 亚洲男gay同性同志| 精品伊人| 精品麻豆| 国产最新进精品视频| 国内久久婷婷综合欲色啪| 欧美一二区视频| 免费国产成人| 我的美女奴隶| 黑人巨荃大战乌克兰美女| 国产精品国色综合久久| 女子张腿让男人桶免费| 亚洲欧美另类专区| 97精品久久天干天天蜜| 国产成人精品免费| 欧美在线视频一区在线观看| 亚洲AV精品一区二区三区不卡 |